Difference between revisions of "Team:ZJU-China/Model"

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<html lang="zh-CN">
 
<html lang="zh-CN">
  <head>
+
<head>
 
     <!-- Meta, title, CSS, favicons, etc. -->
 
     <!-- Meta, title, CSS, favicons, etc. -->
<!-- Bootstrap core CSS -->
+
    <!-- Bootstrap core CSS -->
  
<!-- <link href="css/bootstrap.css" rel="stylesheet"> -->
+
    <!-- <link href="css/bootstrap.css" rel="stylesheet"> -->
<!-- <link href='css/bootstrap.css' rel='stylesheet' type='text/css'> -->
+
    <!-- <link href='css/bootstrap.css' rel='stylesheet' type='text/css'> -->
<link href="https://2017.igem.org/Zju/css/bootstrap?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet" media="screen" />
+
    <link href="https://2017.igem.org/Zju/css/bootstrap?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet" media="screen"/>
  <!-- Optional Bootstrap Theme -->
+
    <!-- Optional Bootstrap Theme -->
  
  
<!-- <link href="css/bootstrap-theme.css" rel="stylesheet" id="bs-theme-stylesheet"> -->
+
    <!-- <link href="css/bootstrap-theme.css" rel="stylesheet" id="bs-theme-stylesheet"> -->
<link href="https://2017.igem.org/Zju/css/bootstraptheme?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet" id="bs-theme-stylesheet">
+
    <link href="https://2017.igem.org/Zju/css/bootstraptheme?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet"
 +
          id="bs-theme-stylesheet">
  
<!-- 按钮的字体 -->
+
    <!-- 按钮的字体 -->
<link href='https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/cs/font?action=raw&ctype=text/css' rel='stylesheet' type='text/css'>
+
    <link href='https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/cs/font?action=raw&ctype=text/css' rel='stylesheet' type='text/css'>
<!-- 按钮的字体end -->
+
    <!-- 按钮的字体end -->
  
<!-- Documentation extras -->
+
    <!-- Documentation extras -->
  
<link href="https://2017.igem.org/Zju/css/docs/min?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet" type="text/css"/>
+
    <link href="https://2017.igem.org/Zju/css/docs/min?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet" type="text/css"/>
  
<!-- <link href="css/doc-style.css" rel="stylesheet" type="text/css"/> -->
+
    <!-- <link href="css/doc-style.css" rel="stylesheet" type="text/css"/> -->
<link href="https://2017.igem.org/Zju/css/doc-style?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet">
+
    <link href="https://2017.igem.org/Zju/css/doc-style?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet">
<link href="https://2017.igem.org/Zju/css/responsive/min?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet">
+
    <link href="https://2017.igem.org/Zju/css/responsive/min?action=raw&ctype=text/css" rel="stylesheet">
  
<script>
+
    <script>
  var _hmt = _hmt || [];
+
        var _hmt = _hmt || [];
</script>
+
    </script>
  </head>
+
</head>
  
  
 
<style>
 
<style>
/*Override default CSS*/
+
    /*Override default CSS*/
#sideMenu, #top_title {display:none;}
+
    #sideMenu, #top_title {
#content { padding:0px; width:100%; margin-top:-7px; margin-left:0px;background-color: transparent;}
+
        display: none;
 +
    }
  
 +
    #content {
 +
        padding: 0px;
 +
        width: 100%;
 +
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 +
        margin-left: 0px;
 +
        background-color: transparent;
 +
    }
  
/* set all basic objects to neutral formatting*/
+
    /* set all basic objects to neutral formatting*/
html, body, div, span, applet, object, iframe, h1, h2, h3, h4, h5, h6, p, blockquote, pre, a, abbr, acronym, address, big, cite, code, del, dfn, em, font, img, ins, kbd, q, s, samp, small, strike, strong, sub, sup, tt, var, b, u, i, center, dl, dt, dd, ol, ul, li, fieldset, form, label, legend, caption {
+
    html, body, div, span, applet, object, iframe, h1, h2, h3, h4, h5, h6, p, blockquote, pre, a, abbr, acronym, address, big, cite, code, del, dfn, em, font, img, ins, kbd, q, s, samp, small, strike, strong, sub, sup, tt, var, b, u, i, center, dl, dt, dd, ol, ul, li, fieldset, form, label, legend, caption {
    margin: 0;
+
        margin: 0;
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+
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+
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+
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+
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+
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+
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}
+
    }
  
#globalWrapper {
+
    #globalWrapper {
    margin: 0;
+
        margin: 0;
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+
        padding: 0;
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+
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+
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+
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+
        vertical-align: baseline;
    background: transparent;
+
        background: transparent;
}
+
    }
  
 +
    /* set page to fill window*/
 +
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 +
        height: 100%;
 +
    }
  
/* set page to fill window*/
+
    body {
html{
+
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+
        background-color: #FFFFFF;
}
+
    }
body {
+
  min-height: 100%;
+
  background-color: #FFFFFF;  
+
}
+
  
 +
    #content_wrapper {
 +
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 +
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 +
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 +
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 +
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 +
        height: 100%;
 +
        text-align: center;
 +
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 +
    }
  
#content_wrapper {
+
    #content_wrapper p {
    position: relative;
+
        font-family: 'Yanone Kaffeesatz', Tahoma, Geneva, sans-serif;
  top: 0px;
+
     }
  left: 0px; 
+
  margin: 0px;
+
    width: 100%;
+
    height: 100%;
+
  text-align:center;
+
     background-color: #FFFFFF;
+
}
+
  
#content_wrapper p {
+
    #content_wrapper a {
    font-family: 'Tempus Sans ITC',Tahoma, Geneva, sans-serif;
+
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}
+
    }
  
#content_wrapper a {  
+
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    color:#004789;
+
        position: absolute;
}
+
        bottom: 0px;
 +
        left: 0px;
 +
        width: 100%;
 +
        margin-top: 0px;
 +
        margin-bottom: 20px;
 +
        background-color: #FFFFFF;
 +
        text-align: center;
 +
    }
  
 +
    .center {
 +
        width: 60%;
 +
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 +
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 +
        padding-bottom: 32px;
 +
        display: inline-block;
 +
    }
  
#footer {  
+
    .TextContent {
    position:absolute;   
+
        text-align: left;
    bottom: 0px;
+
        vertical-align: baseline;
    left: 0px;
+
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    width: 100%;
+
        font-family: 'Yanone Kaffeesatz', verdana, sans-serif;
    margin-top: 0px;
+
     }
    margin-bottom: 20px;
+
    background-color: #FFFFFF;
+
     text-align: center;
+
}
+
  
.center {  
+
    .TextContent h1 {
  width: 60%;  
+
        text-align: center;
    margin-top: 16px;
+
        font-size: 1.5rem;
  min-width: 500px;
+
        margin-bottom: 1em;
    padding-bottom:32px;
+
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  display: inline-block;      
+
        color: #3399ff;
}
+
        font-family: 'Yanone Kaffeesatz', verdana, sans-serif;
 +
    }
  
.TextContent {
+
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  text-align: left;
+
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  vertical-align: baseline;
+
        margin-bottom: 0em;
  font-size: 0.875em;
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  font-family:'Tempus Sans ITC', verdana, sans-serif;
+
        text-align: left;
}
+
        font-family: 'Yanone Kaffeesatz', verdana, sans-serif;
 +
    }
  
.TextContent h1{  
+
    .TextContent p {
  text-align: center;
+
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  font-size: 1.5rem;
+
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+
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  margin-top: 0.2em;
+
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+
}
+
  
.TextContent h2{
+
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+
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+
    }
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+
}
+
  
.TextContent p{
+
    .Quarter_Image {
  margin-bottom: 1.2em;
+
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  font-family:'Tempus Sans ITC', verdana, sans-serif;
+
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+
        float: left;
 +
    }
  
.Page_Wide {
+
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  width:100%;  
+
        display: block;
}
+
        margin: auto;
 +
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 +
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 +
    }
  
.Quarter_Image {
+
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  width:25%;
+
        width: 100%;
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+
    }
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+
}
+
  
.Quarter_Image img {
+
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    display:block;
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        display: inline-block;
}
+
        float: left;
  
.SocialMediaIconWrapper {
+
     }
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+
}
+
  
.SocialMediaIcon {
+
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+
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    height:auto;
+
        height: auto
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+
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+
    float:left;
+
  
}
+
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 +
        width: 100%;
 +
    }
  
.SocialMediaIcon img{
+
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    max-width:100%;
+
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+
        height: auto
}
+
    }
  
.TeamImage {
+
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  width:100%;  
+
        width: 100%;
}
+
    }
  
.TeamImage img {
+
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    max-width:100%;
+
        width: 100%;
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+
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}
+
  
.sponsors {
+
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    }
  
.sponsor_row {  
+
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.sponsor_img {  
+
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+
    }
}
+
  
.sponsor_img img{  
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}
+
  
.clear {
+
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+
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 +
    }
  
.clear.extra_space {
+
    .copyright {
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+
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+
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 +
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 +
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.line_divider {
+
    .copyright a {
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+
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}
+
  
.copyright{
+
    .PP {
  color: #888888;
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        font-family: georgia;
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+
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 +
    }
  
 +
    /*文中自定义*/
 +
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 +
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.copyright a{
+
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+
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}
+
    }
  
/*文中自定义*/
+
    .SmallCB {
.CuteButton:active {
+
        font-size: 1.5em;
    -webkit-box-shadow: 0px 3px 0px rgba(0,52,63,1), 0px 3px 6px rgba(0,0,0,.9);
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        margin-left: 2px;
    -moz-box-shadow: 0px 3px 0px rgba(0,52,63,1), 0px 3px 6px rgba(0,0,0,.9);
+
        padding: 2px 10px;
    box-shadow: 0px 3px 0px rgba(0,52,63,1), 0px 3px 6px rgba(0,0,0,.9);
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+
     }
     top: 6px;
+
}  
+
  
.YellowCB {
 
    background-color: rgba(254,196,62,1);
 
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.GreenCB {
 
    background-color: rgba(25,148,117,1);
 
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.SmallCB {
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    .ArticleHead{
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+
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.ArticleHead{
+
    .PP{
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+
  
.H3Head{
 
  font-family: 'Tempus Sans ITC',georgia !important;
 
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+
    h2{
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+
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+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Project/voc">VOC sensors</a></li>
+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Project/st">Signal Transduction</a></li>
+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Project/ms">Mat Synthesis</a></li>
+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Project/conclusion">Conclusion</a></li>
+
                  <!--<li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Project/improvement">Improvement</a></li>-->
+
                  <!--<li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/InterLab">Interlab</a></li>-->
+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Notebook">Notebook</a></li>
+
                  </ul>
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              </li>
+
             
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+
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+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Model">Summery</a></li>
+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Model/coculture">Coculture</a></li>
+
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Model/voc">VOC analysis</a></li>
+
  
                  </ul>
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            </div>
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                <ul class="dropdown-menu ">
+
                                class="caret"></b></a>
                    <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/overview">All Parts</a></li>
+
                        <ul class="dropdown-menu ">
                    <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/overview/achievements">Basic Parts</a></li>
+
                            <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/overview">Project Description</a></li>
                    <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/InterLab">Composite Parts</a></li>
+
                            <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/overview/achievements">Achievements</a>
                    <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/ImproveParts">Parts Collection</a></li>
+
                            </li>
                </ul>
+
                        </ul>
            </li>
+
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+
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 +
                            <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Project/improvement">Improvement</a></li>
 +
                            <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/InterLab">Interlab</a></li>
 +
                            <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Notebook">Notebook</a></li>
 +
                        </ul>
 +
                    </li>
  
             
+
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+
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+
                        <ul class="dropdown-menu ">
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+
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+
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                  </ul>
+
                            <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Model/voc">VOC analysis</a></li>
              </li>
+
                        </ul>
 +
                    </li>
  
              <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/HP/Collaborations">Collaborations</a></li>
+
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                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/HP/Gold_Integrated">Gold</a></li>
 
                  </ul>
 
              </li>
 
  
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+
                    <li class="m_nav_item dropdown">
                <a href="#" class="dropdown-toggle link" data-toggle="dropdown">Team<b class="caret"></b></a>
+
                        <a href="#" class="dropdown-toggle link" data-toggle="dropdown">Safety<b class="caret"></b></a>
                  <ul class="dropdown-menu ">
+
                        <ul class="dropdown-menu ">
                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/team">Teammates</a></li>
+
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                  <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/Attribution">Attribution</a></li>
+
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+
                        </ul>
                  </ul>
+
                    </li>
              </li>
+
  
            </ul>
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                    <li><a href="https://2017.igem.org/Team:ZJU-China/HP/Collaborations">Collaborations</a></li>
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                        </ul>
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<p></p>
 
<p></p>
 
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  <img src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/b/be/ZJUChina_interlab_banner.jpg" width="100%">
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      <div class="bs-docs-section">
+
        <div class="bs-docs-section">
  
 
+
            <h1 id="modeling" class="page-header ArticleHead GreenAH">Modeling<hr></h1>
  <h1 id="introduction" class="page-header ArticleHead GreenAH">Introduction<hr></h1>
+
                <h2 id="vocclassification" class="H2Head">VOC Classification</h2>
  <p class="PP">The InterLab study is developed by the Measurement Committee. Since synthetic biology, also been called engineering biology, is based on engineering thinking and methods, it values the reliability and repeatability of measurements. The InterLab study, involving teams and labs around the world,takes green fluorescent protein (gfp) as an example after one strict, detailed protocol to ensure the common, comparable units for measuring, which hopes to test the robustness by comparing the results from different labs.</p>
+
                    <h3 id="overview" class="H3Head">Overview</h3>
  <p class="PP">This is the Fourth Measurement InterLab and our team participates in it. The InterLab this year tries to establish a GFP measurement protocol based on engineering principles, find out the similarity between fluorescence measured around the world and make gene expression more precise and reliable through tests of some RBS devices (BCDs). We are provided with materials for standard curves together with positive control, negative control and devices with different promoters and RBSs. Strictly following the requirements and protocol, we have obtained the relevant datas.</p>
+
                        <p class="PP">The VOC device is designed to judge whether the tobacco is heathy or gets infected. Since this is an inquiry experiment, algorithms in data analysis are widely use in our modeling. We do data preprocessing, data analysis, and algorithm optimization on the data collected by VOC device. Finally, we use Logistic regression and detect the infected tobacco with 91% confidence.</p>
  
<h1 id="methods" class="page-header GreenAH ArticleHead ">METHODS & MATERIALS<hr></h1>
+
                    <h3 id="datapreprocessing" class="H3Head">Data preprocessing</h3>
<h2 id="transformation" class="H2Head">Transformation</h2>
+
                        <p class="PP">First we defragment the raw input data, and reorganize them into a matrix. 10 VOC factors are served as features, and the status(heathy or infected) is served as tag to be predicted.</p>
<p class="PP">Transform Escherichia coli DH5α with these following plasmids:</p>
+
                        <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/4/49/ZJU_China_VOC_1.png' alt=''/>
<p class="PP">
+
                        <p class="PP">Then we analysis the data using box plot and discover that most data are normal, but some records are singular, whose box plot are show as folowing:</p>
<ul class="Retract textli">
+
                        <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/9/97/ZJU_China_VOC_2.png' alt=''/>
    <li>Positive control</li>
+
                        <p class="PP">We remove those records with singular value, and the data left obey normal distribution:</p>
    <li>Negative control</li>
+
                        <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/3/32/ZJU_China_VOC_3.png' alt=''/>
    <li>Test Device 1: J23101+I13504</li>
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                        <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/e/e0/ZJU_China_VOC_4.png' alt=''/>
    <li>Test Device 2: J23106+I13504</li>
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    <li>Test Device 3: J23117+I13504</li>
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    <li>Test Device 4: J23101.BCD2.E0040.B0015</li>
+
    <li>Test Device 5: J23106.BCD2.E0040.B0015</li>
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    <li>Test Device 6: J23117.BCD2.E0040.B0015</li>
+
</ul></p>
+
<p class="PP">Resuspend DNA in selected wells in the Distribution Kit with 10µL ddH20. Thaw competent cells on ice. Pipette 25µL of competent cells into 1.5mL tube per transformation and add 2µL of resuspended DNA into it. Incubate on ice for 30min. Heat shock tubes at 42°C for 90 sec. Then incubate on ice for 5min.</p>
+
<p class="PP">Add 200µL SOC media with Chloramphenicol(1000×) to each transformation. Incubate at 37°C for 1 hours, shaking at 200-300rpm.</p>
+
<p class="PP">Pipette 100µL of each transformation onto LB plates(Chloramphenicol, 1000×). Spread with sterilized spreader. Incubate transformations overnight (14-18hr) at 37°C.</p>
+
  
<h2 id="colonies" class="H2Head">Colonies Selection</h2>
+
                    <h3 id="dataanalysis" class="H3Head">Data analysis</h3>
<p class="PP">Pick 2 single colonies from each of plate and inoculate it on 5-10 mL LB medium with Chloramphenicol(1000×). Grow the cells overnight (16-18 hours) at 37°C and 220 rpm. Check them under the fluorescence microscope before further experiments.</p>
+
                        <p class="PP">Our target is to create a model and predict tobacco's status according to 10 input features. This is a classic two classification problem, and there are several algrithm to solve it. The sampling algorithm is cross validation and the scoring policy we apply is ridit test.</p>
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                        <p class="PP"><strong>Decision Tree</strong></p>
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                        <p class="PP">First we use decision tree based on information theory. ID3 decision tree is used to reduce the most information gain, and CART tree is used to reduce the GINI index. The performance of these two algorithm is almost the same.</p>
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                        <span class="MathJax_Preview"></span>
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                                    <script type="math/tex; mode=display" id="MathJax-Element-1">R=0.83</script>
  
<h2 id="calibration" class="H2Head">Calibration</h2>
+
                        <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/3/30/ZJU_China_VOC_5.png' alt=''/>
<p class="PP">We used the plate reader Synergy Neo2 for all the measurements and we used black 96 well plates with flat, transparent bottom.</p>
+
                        <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/6/61/ZJU_China_VOC_6.png' alt=''/>
  
<h3 class="H3Head">OD600 Reference Point</h3>
+
                    <p class="PP"><strong>MLP</strong></p>
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                        <p class="PP">The second algorithm we apply is Multi-Layer Perception, also called neutral network. In this model, we use more than 100 neurons in each layer and the activation function is relu.</p>
 +
                        <p class="PP">The result of MLP is much better than decision tree.</p>
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                                d="M352 287Q304 211 232 211Q154 211 104 270T44 396Q42 412 42 436V444Q42 537 111 606Q171 666 243 666Q245 666 249 666T257 665H261Q273 665 286 663T323 651T370 619T413 560Q456 472 456 334Q456 194 396 97Q361 41 312 10T208 -22Q147 -22 108 7T68 93T121 149Q143 149 158 135T173 96Q173 78 164 65T148 49T135 44L131 43Q131 41 138 37T164 27T206 22H212Q272 22 313 86Q352 142 352 280V287ZM244 248Q292 248 321 297T351 430Q351 508 343 542Q341 552 337 562T323 588T293 615T246 625Q208 625 181 598Q160 576 154 546T147 441Q147 358 152 329T172 282Q197 248 244 248Z"></path></defs><g
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                                                                                    y="0"></use></g></g></svg></span></span>
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                            <script type="math/tex; mode=display" id="MathJax-Element-2">R=0.89</script>
  
<p class="PP">Add 100 µl LUDOX into wells A1, B1, C1, D1 and 100 µl of H2O into wells A2, B2, C2, D2. Measure absorbance 600nm of all samples in all standard measurement modes in instrument, pathlength correction was turned off. The temperature setting was 24℃. Record the data.</p>
+
                        <p><img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/9/91/ZJU_China_VOC_7.png' alt=''/>
 +
                        </p>
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                        <p class="PP"><strong>Leaner Model</strong></p>
 +
                        <p class="PP">Although the performance of MLP has been good enough, it&#39;s difficult to extract konwledge
 +
                            learn by algorithm, the interpretability is weak. Why don&#39;t we try a simple model with
 +
                            high interpretability? First we try LDA algorithm to compress the 10dimensions data into 2
 +
                            dimensions.</p>
 +
                        <p><span class="MathJax_Preview"></span><span class="MathJax_SVG_Display"
 +
                                                                      style="text-align: center;"><span
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                        </p>
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                                                                                  xlink:href="#E8-MJMATHI-54" x="1013"
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                                                                                  y="408"></use><g
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                                transform="translate(1314,0)"><use xlink:href="#E8-MJMATHI-53" x="0" y="0"></use><use
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                                transform="scale(0.707)" xlink:href="#E8-MJMATHI-77" x="867" y="-213"></use></g><use
 +
                                xlink:href="#E8-MJMATHI-77" x="2534" y="0"></use></g></g></g></g></svg></span></span>
 +
                            <script type="math/tex; mode=display" id="MathJax-Element-8">J=\frac{w^TS_bw}{w^TS_ww}
 +
                            </script>
 +
                            , the target of LDA is maxmize the <span class="MathJax_Preview"></span><span
 +
                                    class="MathJax_SVG" id="MathJax-Element-9-Frame" tabindex="-1"
 +
                                    style="font-size: 100%; display: inline-block;"><svg
 +
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                                    style="vertical-align: -0.255ex;"><defs><path stroke-width="1" id="E9-MJMATHI-4A"
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 +
                            <script type="math/tex" id="MathJax-Element-9">J</script>
 +
                        </p>
 +
                        <p>The result of LDA algorithm is as following and <span class="MathJax_Preview"></span><span
 +
                                class="MathJax_SVG" id="MathJax-Element-10-Frame" tabindex="-1"
 +
                                style="font-size: 100%; display: inline-block;"><svg
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                            :
 +
                        </p>
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                        <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/6/61/ZJU_China_VOC_8.png' alt=''/>
  
<h3 class="H3Head">Fluorescein Fluorescence Standard Curve</h3>
+
                        <p class="PP">This result prove the data are linear separable, then we choose logistics regression
<p class="PP">Spin down fluorescein stock tube. Prepare 2x fluorescein stock solution (100 µM) by resuspending fluorescein in 1 mL of 1xPBS. Dilute the 2x fluorescein stock solution with 1xPBS to make a 1x fluorescein solution and resulting concentration of fluorescein stock solution 50 µM.</p>
+
                            algorithm.</p>
<p class="PP">Prepare the serial dilutions of fluorescein as shown below. Set 4 copies.</p>
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                        <p class="PP">We difine <span class="MathJax_Preview"></span><span class="MathJax_SVG"
+
                                                                                id="MathJax-Element-11-Frame"
<img class="textimg" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/7/71/ZJUChina_interlab_screenshot1.png">
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                                                                                tabindex="-1"
<p class="PP">Measure the plate in plate reader, the excitation filter was set to 485nm/5nm and the emission filter was set to 530nm/30nm. Pathlength correction was turned off. The gain setting was 70. Fluorescence was from the top. The temperature setting was 24℃. Record the data.</p>
+
                                                                                style="font-size: 100%; display: inline-block;"><svg
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                                d="M52 289Q59 331 106 386T222 442Q257 442 286 424T329 379Q371 442 430 442Q467 442 494 420T522 361Q522 332 508 314T481 292T458 288Q439 288 427 299T415 328Q415 374 465 391Q454 404 425 404Q412 404 406 402Q368 386 350 336Q290 115 290 78Q290 50 306 38T341 26Q378 26 414 59T463 140Q466 150 469 151T485 153H489Q504 153 504 145Q504 144 502 134Q486 77 440 33T333 -11Q263 -11 227 52Q186 -10 133 -10H127Q78 -10 57 16T35 71Q35 103 54 123T99 143Q142 143 142 101Q142 81 130 66T107 46T94 41L91 40Q91 39 97 36T113 29T132 26Q168 26 194 71Q203 87 217 139T245 247T261 313Q266 340 266 352Q266 380 251 392T217 404Q177 404 142 372T93 290Q91 281 88 280T72 278H58Q52 284 52 289Z"></path><path
 +
                                stroke-width="1" id="E14-MJMAIN-3B"
 +
                                d="M78 370Q78 394 95 412T138 430Q162 430 180 414T199 371Q199 346 182 328T139 310T96 327T78 370ZM78 60Q78 85 94 103T137 121Q202 121 202 8Q202 -44 183 -94T144 -169T118 -194Q115 -194 106 -186T95 -174Q94 -171 107 -155T137 -107T160 -38Q161 -32 162 -22T165 -4T165 4Q165 5 161 4T142 0Q110 0 94 18T78 60Z"></path></defs><g
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 +
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 +
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 +
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 +
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 +
                                                                                    y="-213"></use></g><use
 +
                                xlink:href="#E14-MJMAIN-3B" x="9435" y="0"></use><use xlink:href="#E14-MJMATHI-77"
 +
                                                                                      x="9881" y="0"></use><use
 +
                                xlink:href="#E14-MJMAIN-2C" x="10597" y="0"></use><use xlink:href="#E14-MJMATHI-62"
 +
                                                                                      x="11042" y="0"></use><use
 +
                                xlink:href="#E14-MJMAIN-29" x="11472" y="0"></use></g></svg></span></span>
 +
                            <script type="math/tex; mode=display" id="MathJax-Element-14">
 +
                                l(w,b)=\sum_{i=1}^{m}lnp(y_i|x_i;w,b)
 +
                            </script>
 +
                        </p>
 +
                        <p class="PP">Then we can apply maximum likelihood method algorithm to estimate the paramaters.</p>
 +
                        <p class="PP">The result is as following:</p>
  
<h2 id="cellmeasurement" class="H2Head">Cell Measurement</h2>
+
                            <p class="PP">Weight:</p>
<p class="PP">Measure OD<sub>600</sub> of the overnight cultures prepared after colony selection, then dilute the culture to a target OD600 of 0.02 in LB medium + Chloramphenicol with the help of Excel(Dilution Calculation) sheet. Incubate the cultures at 37°C and 220 rpm. Take 500 µL samples of the cultures from each of the 8 devices, two colonies per device, at 0, 2, 4, and 6 hours of incubation and add them into 96 well plates as shown below. Place samples on ice before measurements</p>
+
                            <p class="PP">[[ 0.1819504  0.38788225  0.01350023  0.39594948  0.17799418</p>
<img class="textimg" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/a/a1/ZJUChina_interlab_screenshot2.png">
+
                            <p class="PP">0.42087034</p>
<p class="PP">Measure the samples (OD and Fl measurement). The cell measurement was under the same condition with fluorescein fluorescence standard curve and used the same plate.</p>
+
                            <p class="PP">-0.57733395 -0.23876003 -0.00532918 -0.46174515]]</p>
<h1 id="results" class="page-header ArticleHead GreenAH">Results<hr></h1>
+
                            <p class="PP">Intercept:</p>
 +
                            <p class="PP">[ 0.00937812]</p>
 +
                            <p class="PP">Effect:</p>
 +
                            <p class="PP">D    35.300735</p>
 +
                            <p class="PP">B    22.596339</p>
 +
                            <p class="PP">F    18.289277</p>
 +
                            <p class="PP">E    10.265025</p>
 +
                            <p class="PP">C    0.393225</p>
 +
                            <p class="PP">I    -1.575564</p>
 +
                            <p class="PP">A  -10.679026</p>
 +
                            <p class="PP">H  -14.398440</p>
 +
                            <p class="PP">G  -26.211964</p>
 +
                            <p class="PP">J  -39.130542</p>
 +
                            <p class="PP">dtype: float64</p>
 +
                            <p class="PP">Score:</p>
 +
                            <p class="PP">0.894333333333</p>
  
<h2 id="OD600" class="H2Head">OD600 Reference point</h2>
+
                <h2 class="H2Head">Algorithm optimization</h2>
 +
                <p class="PP">From the result of logistics regression, factor C and I and etc. are with less important weight,
 +
                    these factors maybe disturb the classifaction. We try to reduce unimportant factors and simplify the
 +
                    model.</p>
 +
                <p class="PP">Finally, we reserve 4 factors with which we can predict the tobacco in 91% confidence and also reduce
 +
                    the VOC device.</p>
  
<div class="panel panel-default">
+
                    <p class="PP">Weight:</p>
  <!-- Default panel contents -->
+
                    <p class="PP">[[ 0.53196697  0.3404023  -0.53555988 -0.45588715]]</p>
   <div class="panel-heading">Panel heading</div>
+
                    <p class="PP">Intercept:</p>
 +
                    <p class="PP">[-0.01204088]</p>
 +
                    <p class="PP">Effect:</p>
 +
                    <p class="PP">D    33.217011</p>
 +
                    <p class="PP">F    15.492680</p>
 +
                    <p class="PP">G   -17.319760</p>
 +
                    <p class="PP">J  -33.967849</p>
 +
                    <p class="PP">dtype: float64</p>
 +
                    <p class="PP">Score:</p>
 +
                    <p class="PP">0.912444444444</p>
 +
                <img class="textimg" src='https://static.igem.org/mediawiki/2017/7/73/ZJU_China_VOC_9.png' alt=''/>
  
  <!-- Table -->
+
                <h2 class="H2Head">Summary</h2>
  <table class="table">
+
                    <p class="PP">In this model, we try different algorithm to abttain a robust, interpretable, and accurate solution
  <tr>
+
                    to predict whether the tobacco is infected only according to 4 features in 91% confidence. Since
<th> </th>
+
                    there are 6 VOC sensors are meaningless in this model, we the device can also be simplified by
<th>LUDOX-HS40</th>
+
                    reduce them.</p>
<th>H<sub>2</sub>O</th>
+
        </div>
</tr>
+
  
<tr>
 
<th>Replicate 1</th>
 
<td class="blueTable">0.05</td>
 
<td class="blueTable">0.035</td>
 
</tr>
 
  
<tr>
 
<th>Replicate 2</th>
 
<td class="blueTable">0.049</td>
 
<td class="blueTable">0.037</td>
 
</tr>
 
  
<tr>
+
        </div>
<th>Replicate 3</th>
+
<td class="blueTable">0.049</td>
+
<td class="blueTable">0.039</td>
+
</tr>
+
 
+
<tr>
+
<th>Replicate 4</th>
+
<td class="blueTable">0.049</td>
+
<td class="blueTable">0.039</td>
+
</tr>
+
 
+
<tr>
+
<th>Arith. Mean</th>
+
<td class="yellowTable">0.04925</td>
+
<td class="yellowTable">0.0375</td>
+
</tr>
+
 
+
<tr>
+
<th>Corrected Abs600</th>
+
<td class="yellowTable">0.01175</td>
+
<td> </td>
+
</tr>
+
 
+
<tr>
+
<th>Reference OD600</th>
+
<td class="yellowTable">0.0425</td>
+
<td> </td>
+
</tr>
+
 
+
<tr>
+
<th>OD600/Abs600</th>
+
<td class="yellowTable">3.617021277</td>
+
<td> </td>
+
</tr>
+
 
+
  </table>
+
 
</div>
 
</div>
  
<h2 id="fluorescein" class="H2Head">Fluorescein Fluorescence Standard Curve</h2>
+
        <!-- 右侧监听开始 -->
 +
        <div class="col-md-3 disappear-on-top" role="complementary">
 +
            <nav style="position: fixed; top: 100px ; left:50px; "
 +
                class="bs-docs-sidebar hidden-print hidden-xs hidden-sm">
 +
                <ul class="nav bs-docs-sidenav">
 +
                    <li><a href="#modeling">Modelling</a></li>
 +
                    <li>
 +
                        <a href="#vocclassification">VOC Classification</a>
 +
                        <ul class="nav">
 +
                            <li><a href="#datapreprocessing">Transformation</a></li>
 +
                            <li><a href="#dataanalysis">Data Analysis</a></li>
 +
                        </ul>
 +
                    </li>
 +
                    <li>
 +
                        <a href="#results">Results</a>
 +
                        <ul class="nav">
 +
                            <li><a href="#OD600">OD600</a></li>
 +
                            <li><a href="#fluorescein">Fluorescein</a></li>
 +
                            <li><a href="#discussion">Discussion</a></li>
 +
                            <li><a href="#reflection">Reflection</a></li>
 +
                        </ul>
 +
                    </li>
 +
                    <li>
 +
                        <a href="#feedback">Feedback</a>
 +
                        <ul class="nav">
 +
                            <li><a href="#advantages">Advantages</a></li>
 +
                            <li><a href="#improvements">Improvements</a></li>
 +
                        </ul>
 +
                    </li>
 +
                </ul>
  
<img style="width: 40%;" class="textimg" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/9/9c/ZJUChina_interlab_diagram1.png">
+
                <a class="back-to-top" href="#top">
<img style="width: 40%;" class="textimg" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/b/b2/ZJUChina_interlab_diagram2.png">
+
                    <!--  <i class="fa fa-arrow-up nav_icon"></i> -->
<h2 id="discussion" class="H2Head">Discussion</h2>
+
                    <img style="width: 50px;" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/d/da/ZJU_China_UP.png">
<img class="textimg" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/8/83/ZJUChina_interlab_diagram3.png">
+
                </a>
<p class="PP">Abs600 of the samples changed over time as shown, in which the data of each sample is the average of 4 replicates. Abs600 of the samples reflected its concentration, which could show the growth of bacteria. As the picture shown, the growth rate of bacteria generally got slower as time went by, this is probably because at the beginning of the measurement, bacteria was in the later period of logarithmic phase and the resources were not that sufficient, inhibiting the growth. Several samples appeared to be different, such as colony 1 of device 4, which seemed to be in the logarithmic phase and colony 2 of device 1, whose concentration went down after 2 hours of incubation, perhaps low activity resulting in massive death.</p>
+
<p class="PP">In addition, growth curves of each colony were different. This may be caused by different initial concentration of samples after dilution, which led the samples be in different growing statuses. We will mention it later.</p>
+
<img class="textimg" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/6/6e/ZJUChina_interlab_diagram4.png">
+
<img class="textimg" src="https://static.igem.org/mediawiki/2017/3/3e/ZJUChina_interlab_diagram5.png">
+
<p class="PP">The fluorescence differed obviously. The absolute fluorescence and relative fluorescence of device 3, device 5 and device 6 were relatively low, for which their promoters and RBSs might account. For two replicates of device 1, their fluorescence differed greatly and the same as growth, making it hard to compare. Either operational error or colony selection would affect.</p><p class="PP">Furthermore, the tendence of absolute fluorescence turned out to rise and fall, mostly going down as time went by. We thought this was because the protein expression varied in different growth phase and growth of bacteria changed over time.</p>
+
<h2 id="reflection" class="H2Head">Reflection</h2>
+
<p class="PP">Some of our operations might affect the results, which can be improved.</p>
+
<p class="PP">Our lab do not have plate reader, so we borrowed one from other lab. We cultured bacteria and loaded samples in our lab and then took them to the other lab for measurement. Since it took some time to go back and forth, our actual measurement took longer than expectation, so the measurement postponed a little. Though samples were laid on ice, the bacteria could still growth, making the real measurement time different from the demand. Similarly, the cultures settled in the process, leading to the deviation of the concentration after dilution. As a result, the comparability between each sample was affected.</p>
+
<p class="PP">By the way, the first time we did the OD600 Reference Point measurement, we put the 96 well plate containing LUDOX on ice. Then it turned out that the OD600 of LUDOX was lower than water. Maybe LUDOX denatured in the cold environment on ice referred to the official warning. So perhaps it is better not to put LUDOX on ice or anywhere like that.</p>
+
<h1 id="feedback" class="page-header ArticleHead GreenAH">Feedback<hr></h1>
+
<p class="PP">After the InterLab Study measurement, we have something to say about the provided protocol, which goes on like this:</p>
+
  
          <table class="table" style="align-content: center">
 
              <tr>
 
                  <th> </th>
 
                  <th>
 
                      <h2 id="advantages" class="H3Head">Advantages<hr></h2>
 
                      <ul class="Retract textli">
 
                          <li>The protocol is not only detailed but also clear, so it is easy to operate and avoid differences between teams.</li>
 
                          <li>The provided Excel sheets make it easier to calculate.</li>
 
                          <li>There are extra materials for mistakes and failure.</li>
 
                          <li>Some warnings are necessary, such as LUDOX cannot be stored in refrigerator and oversaturated detector will cause low concentrations linear, but high concentrations saturate or fall for Fluorescein standard curve. It helps a lot in finding solutions to problems.</li>
 
                      </ul>
 
                  </th>
 
                  <th>
 
                      <h2 id="improvements" class="H3Head">Improvements<hr></h2>
 
                      <ul class="Retract textli">
 
                          <li>The PDF version of protocol differs from the Excel sheets in some ways, such as the volume of diluted culture. Though it won’t affect the operation and results, it can cause misunderstanding and confusion.</li>
 
                          <li>Excel sheets can list out the computational process, which hopes to contribute to data verification and data analysis.</li>
 
                          <li>More samples and replicates can be involved to avoid mistakes and the time span between measurements can be shortened.</li>
 
                      </ul>
 
                  </th>
 
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<p class="PP">We sincerely hope the InterLab Study this year will success and hope the InterLab Study next year will go well.</p>
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Revision as of 03:39, 18 October 2017

Modeling

VOC Classification

Overview

The VOC device is designed to judge whether the tobacco is heathy or gets infected. Since this is an inquiry experiment, algorithms in data analysis are widely use in our modeling. We do data preprocessing, data analysis, and algorithm optimization on the data collected by VOC device. Finally, we use Logistic regression and detect the infected tobacco with 91% confidence.

Data preprocessing

First we defragment the raw input data, and reorganize them into a matrix. 10 VOC factors are served as features, and the status(heathy or infected) is served as tag to be predicted.

Then we analysis the data using box plot and discover that most data are normal, but some records are singular, whose box plot are show as folowing:

We remove those records with singular value, and the data left obey normal distribution:

Data analysis

Our target is to create a model and predict tobacco's status according to 10 input features. This is a classic two classification problem, and there are several algrithm to solve it. The sampling algorithm is cross validation and the scoring policy we apply is ridit test.

Decision Tree

First we use decision tree based on information theory. ID3 decision tree is used to reduce the most information gain, and CART tree is used to reduce the GINI index. The performance of these two algorithm is almost the same.

MLP

The second algorithm we apply is Multi-Layer Perception, also called neutral network. In this model, we use more than 100 neurons in each layer and the activation function is relu.

The result of MLP is much better than decision tree.

Leaner Model

Although the performance of MLP has been good enough, it's difficult to extract konwledge learn by algorithm, the interpretability is weak. Why don't we try a simple model with high interpretability? First we try LDA algorithm to compress the 10dimensions data into 2 dimensions.

We define as within-class scatter matrix

We define as between-class scatter matrix

So

, the target of LDA is maxmize the

The result of LDA algorithm is as following and :

This result prove the data are linear separable, then we choose logistics regression algorithm.

We difine

Then we can apply maximum likelihood method algorithm to estimate the paramaters.

The result is as following:

Weight:

[[ 0.1819504 0.38788225 0.01350023 0.39594948 0.17799418

0.42087034

-0.57733395 -0.23876003 -0.00532918 -0.46174515]]

Intercept:

[ 0.00937812]

Effect:

D 35.300735

B 22.596339

F 18.289277

E 10.265025

C 0.393225

I -1.575564

A -10.679026

H -14.398440

G -26.211964

J -39.130542

dtype: float64

Score:

0.894333333333

Algorithm optimization

From the result of logistics regression, factor C and I and etc. are with less important weight, these factors maybe disturb the classifaction. We try to reduce unimportant factors and simplify the model.

Finally, we reserve 4 factors with which we can predict the tobacco in 91% confidence and also reduce the VOC device.

Weight:

[[ 0.53196697 0.3404023 -0.53555988 -0.45588715]]

Intercept:

[-0.01204088]

Effect:

D 33.217011

F 15.492680

G -17.319760

J -33.967849

dtype: float64

Score:

0.912444444444

Summary

In this model, we try different algorithm to abttain a robust, interpretable, and accurate solution to predict whether the tobacco is infected only according to 4 features in 91% confidence. Since there are 6 VOC sensors are meaningless in this model, we the device can also be simplified by reduce them.