Team:RDFZ-China/Notebook
RDFZ-China
7.23 1、PCR for BioBricks, 5’ homologous arm, backbone 2、electrophoresis：Validate PCR product 3、枯草杆菌保种 7.24 1、Get genome 2、昨日PCR产物回收 3、Genome PCR 5、引物退火 6、transcribe, replicate pVeg 7.26 1、electrophoresis（genome，退火产物） 8.3 1、enzyme digestion: pHT01, using BamHI & XbaI 2、electrophoresis: testing the product of enzyme digestion（PHT01，PHT01 enzyme digestion product，pVeg PCR, pVeg PCR enzyme digestion product） 10、胶回收 8.4 1、PCR（pVeg，GFP, negative control，positive control） 2、 electrophoresis: test the product of PCR 5、enzyme digestion: YerP, gfp, sfp, pSB1C3 6、Ligation 7、PCR产物回收 8、transcription 8.5 1、enzyme digestion: pVeg, RBS, Backbone 2、Colony PCR（sfp2 A 抗, YerP1 A抗, YerP2 A抗） 8.9 1、electrophoresis: 菌PCR 2、get genome，ER，尝试双酶切验证质粒 8.10 1、B.sub 感受态制备 2、8月9号转化涂板因未吹干失败，菌落被感染 8.14 1、enzyme digestion: sfp，pSB1C3 2、electrophoresis: test the product of胶纯化 3、transcribe RFP Construct（control） 4、ligate 19-TC 载体，product（YerP /sfp），Solution Ⅰ Control 8.21 1、PCR（sfp，YerP，pVeg，positive control，negative control） 3、ligation pVeg-RBS A抗 8.21 1、Transformation（pVeg DH5α C抗，pVeg RBF DH5α A抗，D6B HP K抗，PUC19 对照A抗（稀），rfp枯草未知1，rfp枯草未知2，PUC19对照A抗（浓）, pVeg DH5α A抗，rfp DH5α K抗，pVeg RBS A抗，sfp, YerP） 8.22 1、Taq Super-mix 2、electrophoresis 3、Digestion 4、Ligation 8.23 1、electrophoresis（D2000，1kb Plus Ladder，pSB1A3-GFP，pSB1C3-pTet-GFP，positive control，negative control） 2、digestion for validation 3、electrophoresis（ladder， pveg，pveg切，pveg-RBS，pveg-RBS 切，pH101-RFP，pH101-RFP切，T-sfp，T-sfp 旧，T-YerP，sfp-RBS） 9.2 1、PCR plasmid（T-sfp提，T-YerP提，sfp-RBS提，pvg-RBS提，T-sfp连，T-YerP连，sfp-RBS连，pvg-RBS连，pveg-RBS） 2、electrophoresis（ladder，pSB1A3-GFPpSB1C3-pTet-GFP丙sfp2 A 抗, 庚， YerP1 A抗, 辛, negative control，positive control）（ladder，TSFP1，TSFP2，TSFP3，TSFP4，TSFP5） （ladder，T-SFP，T-SFP切，sfp-RBS，sfp-RBS切，pVg-RBS，pVg-RBS切，T-YerP，T-YerP切，PHT01-GFP，PHT01-GFP切）（ladder，pSB1A3-GFP，己，T-YerP1，T-YerP2，T-YerP3，T-YerP4，T-YerP5，T-YerP6，T-YerP7） 第19页左半部分不知道说什么 第20页最上面有个5号可能是电泳 9.4 1、transcribe T-sfp，T-YerP 9.5 1、PCR（5‘Homologous arm，3’Homologous arm，backbone，BioBricks site） 2、胶回收 3、Transcribe（T-sfp，Y-YerP，pVeg，positive control） 9.8 1、PCR 2、PCR:T-sfp 3、enzyme digestion（E、P），（PSB1C3-rfp plasmid） 4、胶回收 5、验证（ladder，5‘homologous arm，3‘homologous arm，bb，RFP construct） 9.9 1、electrophoresis: test pSB1C3-rfp回收plasmid及7.26PCR得YerP 2、Pfu扩增Biobrick sites及k位点 3、上样（1-6 6管PSB1C3-rfp, 7-8 7.26 YerP，PSB1A3-gfp质粒） 4、YerP平板取菌划线，菌落PCR 7、get plasmid→PSB1C3-rfp construct，PCR 9、electrophoresis: test product of PSB1C3-rfp 回收产物 10、凝胶回收（sfp-biobrick, pVeg） 9.9 1、胶回收 2、electrophoresis1（D2000, RFP1,RFP2,RFP3,Bsub2,Bsub3,Bsub4,Busb5,Bsub6） 3、electrophoresis（D2000, Biobrick，sfp，Pveg） 9.12 1、enzyme digestion（PSB1C3-rfp） 2、electrophoresis——胶回收 （左：ladder，bs，5‘homologous arm，3‘homologous arm，BioBricks site，pSB1C3） （右：ladder，YerP1，YerP2，YerP3，YerP4，pSB1C3） 3、test（ladder，pVeg-RBS，sfp-RBS，sfp-bb，A3，A4，A5，A6） 9.13 1、胶回收 2、PCR（pVeg-RBS，sfp-RBS，ext2） 3、7管PHT01酶切检测 4、第二轮RBS PCR体系 6、electrophoresis：胶回收产物回收（ladder，YerP1，YerP2，YerP3，YerP4，BioBricks site，Backbone，5‘ homologous arm，3‘ homologous arm，BioBricks site） PCR产物 1、 ladder-D2000 2、 pVg-RBS-ext 1 3、 pVg-RBS-ext 2 4、 sfp-RBS-ext 1 5、 sfp-RBS-ext 2 6、 PSB1C3回收 9.14 1、electrophoresis （ladder：1kb plus DNA） 2、pVeg-RBS-ext2 3、sfp-RBS-ext2 4、pHT01 1 5、pHT01 2 9.15 1、pfu: erP+BioBricks site PCR 2、加A 3、YerP 加A 4、electrophoresis（1kb ladder，YerP1 bio，YerP2 bio） 5、electrophoresis（ladder 1kb plus，pVeg-RBS 加A 回收，sfp-RBS 加A 回收，YerP1 回收，YerP2 回收，PSB1C-sfp，RFP3） 6、连接 9.17 1、transcribe: Bsub 2、transcribe: T-YerP 3、OEPCR1 9.18 1、枯草感受态检测——菌落数量 2、回收pVeg+sfp OEPCR 3、重叠PCR体系 9.20 1、OEPCR3 2、菌落PCR（psb1C3-AH） 3、菌PCR electrophoresis（ladder，YerP，sfp，GFP，negative control，positive control，6） 4、回收1000kb左右的pvg-sfp 5、回收OEPCR3 9.21 1、新backbone，BioBricks site用pfu和2017○34GP3 9.22 1、YerP PCR 2、胶回收 9.25 1、PCR：backbone，BioBricks site 9.26 1、OEPCR3 加A 2、electrophoresis（none，ladder D2000，BioBricks site，backbone） 9.27 1、electrophoresis: for testing the product of回收产物 First: 2-5道：T-YerP○5 1-4； 6-9道：T-YerP○4 1-4） Second:（2-5道：AH，1-4；6-7道：BioBricks site，Backbone） 2、transcribe pVeg-bfp 9.28 1、菌PCR（ladder D2000，T-YerP 10，T-YerP 11，T-YerP 9，T-YerP 5，T-YerP 4，T-YerP pvg-sfp，T-YerP粉，划线5，划线4） 9.30 1、菌液PCR 2、Gibson片段-pveg-sfp PCR） 3、electrophoresis（1，2，3，4，5，pveg sfp gibs，+，-） 10.9 1、回收Gib-（pveg-sfp） 2、enzyme digestion pVeg-sfp 3、ligate pSB1C3-pvg-sfp 10.10 1、electrophoresis（ladder，YerP1，YerP2，YerP3，YerP4，5‘ homologous arm，3‘ homologous arm，Gb，bb，BB） 10.11 1、electrophoresis（D2000，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10） 2、electrophoresis（D2000，11，12，13，14，15，16，17，18） 10.16 1、electrophoresis（ladder D2000，OEPCR3） 2、transcribe（control，T-pveg sfp rbs，IDT’s ImrA） 3、electrophoresis testing（1kb plus，OEPCR 回收产物，5‘，3‘，pSB1C3切, p SB1C3） 10.18 1、PCR菌（○1pSB1A3-GFPpSB1C3-pTet-GFP丙丁戊阴○2psb-pvg-sfp连接产物，OEPCR，RFP3，P3FG） 10.19 1、菌PCR（○1ladder 2000，sfp，GFP，negative control，positive control，6）（D2000，psb-pvg-sfp连接产物，OEPCR，RFP3，P3FG） 10.21 1、PCR 2、enzyme digestion（psb1C3，RFP3，lmrA质粒，pvg-sfp） 3、electrophoresis（ladder 1kb plus，OEPCR3，ImrA1，ImrA2，D1，E1） 4、electrophoresis（ladder 1kb plus，A1，B1，C1） 10.22 1、37度恒温箱里（lmrA切1，2（E，P得PCR产物），超薄试剂盒纯化，验证 2、Ligate PSB1C3-lmrA 3、 Transcribe PSB1C3-pveg-sfp转化得平板 4、Gibson 6、gov electrophoresis（1kb plus marker，lmrA切1，2回收，lmrA2*2，lmrA3*2，pvg sfp*2，PSB1C3线性，pSB1C3） 3、菌PCR（D2000，浓pveg-sfp，OEPCR，阳） 4、菌PCR（D2000，YerP，sfp） 10.23 1、electrophoresis（D2000, ImrA2，lmrA2，lmrA3，lmrA4） 10.24 1、electrophoresis（ladder 1kb plus，lmrA2，lmrA3，lmrA4，1-1 pvg-rbs，2-1 pvg-rbs，2-3 pvg-rbs，1-2 pvg-rbs，1-3 pvg-rbs，RFP
